Подготовка проб. Образцы размером 30x30x30 мм и массой 35-40 м берут от мясной туши, полутуши или ее части. При отборе образцов одновременно оценивают органолептический состояние исследуемого мяса и фиксируют данные в тетради.

Образец вырезают острым ножом перпендикулярно поверхности (в глубь мышц), чтобы одна из сторон образца была внешней поверхностью туши или ее части, а другая — поверхностью разруба или разреза. При этом избегают сдавливание мышц, омовения и очищения этих поверхностей, а также прикосновения к ним посторонних предметов или пальцев рук. Каждый образец подлежит маркировке.

Для быстрой фиксации материала вырезанные из образцов пробы помещают в небольшую колбу или широкую пробирку, заливают четырьмя или пятью объемами нейтрального водного раствора формалина (объемной долей 10-20%) и подогревают на пламени горелки, не доводя до кипения. С появлением пузырьков воздуха подогрев прекращают, содержимое осторожно встряхивают и снова подогревают до появления пузырьков воздуха. Так повторяют трижды (в течение 1-2 мин). Критерием окончательной фиксации проб служит одинаковые серые цвета кусочков как на поверхности, так и в центре. При комнатной температуре для ионной фиксации нужно 18-24 ч.

Порядок проведения анализа. С фиксированной материала вырезают небольшие кусочки размером 10x5x4 мм, толщина проб не должна превышать 4 мм, а объем збезводнюванои жидкости должен составлять не менее 15-20см3 на одну пробу.

Последовательно обезвоживают пробы в растворах этанола объемными долями 50, 70, 96% (два раза) и абсолютном спирте в течение 24 ч, а затем пропитывают раствором целоидину массовой долей 4-6% (I) в течение 6-10 или 8-12% (II) — 5 суток.

По окончании пропитки пробы наклеивают на кубики и уплотняют в парах хлороформа или эфира. Для этого материал из густого целоидину переносят непосредственно на деревянные кубики (целоидин берут с избытком) и помещают в эксикатор, куда одновременно ставят одну-две открытые банки с хлороформом. По окончании уплотнения (4-6 ч) блоки переносят для хранения в раствор спирта (70 об.%). Производить срезы с матери, uia, заключенного в целоидин, желательно через 10-24 ч, но не ранее 3-4 ч после помещения блоков в спирт.

Для ускорения процесса пробы исследуемых материалов толщиной 2 мм фиксируют и одновременно обезвоживают при 37 ° С последовательно в жидкостях: I — 1 ч, II-1, 5 ч; в абсолютном спирте — 3 ч (первая порция — 1,5 ч, вторая — 1,5 ч), в смеси спирта и эфира — 30 мин. Затем пробы при той же температуре погружают в растворы целоидину массовыми долями 2, 6 и 12% на 18 ч каждый. Далее пробы наклеивают на деревянные кубики, подсушивают на воздухе в течение 20-40 мин и погружают для уплотнения в хлороформ на 30-40 мин. Хранят блоки в растворе

Спирта (70про.%)

Для изготовления тонких срезов применяют специальный прибор — микротом, состоящий из станины, микроматричного устройства, владельцев пробы и ножа. Микротом закрепляют на краю стола, слева устанавливают баллон с диоксидом углерода вертикально вентилем вниз. Перед началом резки открывают вентиль баллона. Владелец ножа перемещают по направлению к себе до отказа и опускают микротомных столик с помощью рукоятки микрометрического винта. Зафиксированную и промытую в воде пробу мяса кладут на столик микротомы и обильно смачивают водой из пипетки. В владельцу закрепляют микротомных чем и с помощью микрометрического винта поднимают предметный столик к столкновению образца мяса с ножом. Чем отводят от себя, прижимая образец к столику, и начинают его замораживать, выпуская диоксид углерода небольшими порциями. Объект замораживают до появления металлического звука при постукиванииПо нему пинцетом или скальпелем. Краем ножа с одновременной подачей предметного столика с помощью микровинта вверх выравнивают поверхность образца. Затем чем возвращают в рабочее положение. Разрезание должно производиться средней частью лезвия ножа. Установив регулятор в положение 15 или 30 мкм, приступают к изготовлению срезов в плоскости, параллельной продольной оси мышечных волокон.

Полученные срезы снимают с ножа кисточкой или пальцем в направлении лезвия и переносят в кристаллизатор с водопроводной водой на несколько секунд расправления. Во невредим срез быстро подводят предметное стекло, обработанное яичным белком с глицерином для наклеивания, и извлекают срез из воды, удерживая его на середине стекла препаровальные иглой. Затем срез накрывают плотным сухим фильтровальной бумагой (три-четыре слоя) и, проглаживая бумагу ребром ладони, наклеивают срез на предметное стекло. Затем срезы окрашивают, обезвоживают, освещают и заключают в бальзам под покровное стекло.

При использовании санного микротомы целоидиновий блок фиксируют на предметном столике специальным зажимом (продольная ось пробы должна располагаться параллельно продольной оси микротомы). Как устанавливают в держателе под острым углом микротомы (обычно угол 13-15 °). Предварительно рекомендуется выровнять поверхность целоидинового блока. Нож и пробу во время разрезания постоянно смачивают раствором спирта (70про.%). Полученные срезы кисточкой расправляют на микротомных ножи, перемещают его к краю и, подхватывая снизу, переносят в раствор спирта (70 об.%).

Для скорости и экономии реактивов при окрашивании используют 8 биологических стеклянных стаканов вместимостью 40 см3 и высотой 85-90 мм с крышками, закрепленными в штативе. Переносить предметные стекла с наклеенными срезами надо аккуратно, чтобы не перенести раствор из одного стакана в другой. В ходе окраски срезы промывают водой в больших чашках-кристаллизаторах.

Срезы, фиксированные целоидином или замороженные, окрашивают по одной схеме. При этом важно выдерживать последовательность и время обработки (мин): гематоксилин Эрлих — 3-5; водопроводная вода-1-2; водный или спиртовой (объемная доля этанола 70про.%) Раствор соляной кислоты массовой долей 1% — 5-30 ; подкисленной аммиаком водопроводная вода (одна капля раствора нашатырного спирта объемной долей 10 — 25% в 100див3 воды-к приобретению срезом синего оттенка) — 2; водный раствор эозина массовой долей 1% — 1; дистиллированная вода-1, раствор спирта об 'емкой долей 50% -1, 70% — 1, 96% — 1; карбол-ксилол — 1; ксилол — 1.

Окрашенные препараты микроскопируют. При этом фиксируют: ядра окрашены в темно-синий, светло-синий или лиловый цвета, мышечные волокна и соединительнотканные прослойки принимают различные тона красного или розового цвета.

При необходимости подробного изучения микроструктуры соединительных и жировых тканей используют избирательные методы окраски по Ван-Гизону и Судана (III или IV). Схемы представлены ниже.

Для соединительных тканей (метод Ван-Гизона):

Гематоксилин Вейгерта (Эрлих) 3-5 мин.

Водопроводная вода 1 мин

Смесь Ван Гизону 5-10 мин.

Дистиллированная вода 1 мин

Этанол (96 об.%) 1 мин

Карбол-ксилол 1 мин

Ксилол

Окрашенные срезы помещают под покровное стекло в пихтового бальзам. В поле зрения наблюдают коллагеновые волокна, окрашенные в красный, протоплазму — в желтый, ядра — в коричневый или темно-синий цвета.

Для жировой ткани:

Этанол (70 об.%) 0,5-1,0 мин

Судан III или IV 5,0-20,0 мин

Окрашенные срезы промывают водопроводной водой (10 — 30 мин.), Помещают в гематоксилин Эрлих или Майера (2-3) мин.

Перекрашены в гематоксилином срезы дифференцируют в водном растворе соляной кислоты массовой долей 1% (до розового цвета) и промывают в водопроводной воде (20-30 мин), переводят в дистиллированную воду (3-5 мин), вытаскивают на предметное стекло наносят капли глицерина или глицерина-желатина и накрывают покровным стеклом.

В результате окрашивания жир приобретает оранжево-красные цвета,

Ядра — темно-синий.

Терапия начинают с просмотра при небольшом увеличении, а затем применяют большее увеличение.