Выделение бензойной и сорбиновой кислот. Пробу продукта массой около 10 г взвешивают с точностью до 0,01 г, измельчают и гомогенизируют с добавкой 25 г сернокислого натрия и 40 мл 1М серной кислоты. Гомогенат переносят в колбу на 1 л, которая соединена с парообразователем, и нагревают (рис.1.).

Рис. 1. Прибор для перегонки с паром.

1-пробка парообразователя 2 — насадка парообразователя 3 — парообразователь с дистиллированной водой, 4 — кипели, 5 — нагреватель парообразователя, 6 — насадка, 7 — гомогенат продукта, 8 — нагреватель, 9 — холодильник, 10 — аллонж, 11 — приемная колба, 12 — раствор щелочи.

В момент, когда жидкость в колбе начинает закипать, закрывают парообразователь пробкой и отгоняют бензойную и Собинов кислоты с паром, собирая около 80 мл дистиллята в приемник, содержащий 10 мл 1М гидроокиси натрия. Дистиллят переносят в распределительную воронку, насыщают сернокислым натрием (на 10 мл дистиллята добавляют 6 г сернокислого натрия), подкисляют 1М серной кислотой до рН 2,0-3,0 и экстрагируют этилацетата трижды по 10 см3. Объединенный экстракт сушат, добавляя 2 г прокаленого безводного сернокислого натрия. Этот экстракт позначуютьV1. Экстракт упаривают в фарфоровой чашке на песочной бане до объема 1 мл.

Хроматографическое разделение.

Готовят смесь растворителей: петролейный эфир — хлороформ-диэтиловый эфир-муравьиная кислота, в отношении объемов 20,0:8,0:2,8:1,2 и заливают в камеру для тонкослойной хроматографии. Пластинку Силуфол УФ 254 размечают простым мягким карандашом (рис.2.) И в точки 1, 2, 5, 6 вносят по 1, 2, 4, 8 мкл раствора 3, при этом количество бензойной кислоты в пятнах составляет 2 , 4, 8 и 16 мкг, а сорбиновой — 0,2; 0,4; 0,8 и 1,6 мкг соответственно. В точки 3 и 4 вносят 3 и 10 мкл экстракта. Нанесение проб проводят микрошприца или калиброванным капилляром с постоянным поддувом воздухом с помощью, например, фена. Диаметр пятна на старте не должен превышать 2-3 мм. Пластинку погружают в камеру и хроматографируют до 15 см от линии старта. Затем пластинку вынимают, подсушивают и рассматривают в УФ-свете с волной 254 нм. Наличие темных пятен в экстракте по Rf Соответствующим стандартам свидетельствует о присутствии этих консервантов в продукте. Пятна в экстракте сравнивают с пятнами стандартов визуально и ориентировочно оценивают содержание бензойной и сорбиновой кислот в пробе. Темные пятна в экстракте и стандартах обводят карандашом в УФ-свете.

Рис. 2. Схема нанесения пробы и стандартов на пластинку Силуфол УФ 254 для разделения и ориентировочной оценки содержания бензойной и сорбиновой кислот.

И — бензойная кислота, Rf = 0,56;

II — сорбиновая кислота, Rf = 0,48.

Подтверждение бензойной и сорбиновой кислот.

Бензойная кислота. Высушенную пластинку разрезают между точками 3 и 4. Одну часть опрыскивают раствором хлорного железа, а затем — перекиси водорода и нагревают 2 мин. при 80-1000С в сушильном шкафу. Появление желто-фиолетовой окраски пятен на хроматограмме экстракта по цвету и Rf, соответствующих пятнам в стандарте бензойной кислоты, подтверждает наличие ее в пробе.

Сорбиновая кислота. Вторую часть пластинки опрыскивают раствором бихромата калия в серной кислоте, подсушивают раствором тиобарбитуровой кислоты и нагревают 5 минут при 1000С в сушильном шкафу. Появление малиновой окраски пятен на хроматограмме экстракта, по цвету и Rf соответствующих пятнам в стандарте сорбиновой кислоты, подтверждает ее наличие в пробе.

Количественное определение бензойной и сорбиновой кислот.

Пластинку размечают мягким карандашом и наносят на линию старта ряд точек — точно фиксированное количество опытной пробы, обычно в пределах 1-8 мкл, а затем холостой пробы (15 см3 этилацетата, упаренной до объема опытной пробы) и таким же образом раствор 3 стандартов с учетом расчетных количеств бензойной и сорбиновой кислот в пробе, чтобы количество сорбиновой кислоты не превышала в точке 5 мкг. Пластинку подсушивают и помещают в камеру для хроматографирования с предварительно налитой смесью растворителей. После прохождения фронтом растворителей около 15 см от линии старта пластинку вынимают, сушат и рассматривают в УФ-свете. Обводят карандашом темные пятна бензойной и сорбиновой кислот в опытной пробе и стандартах и соответствующие зоны в холостой пробе. Обведены зоны вырезают и помещают в пробирки, в которые заливают по 3 см3 этилацетата. Пробирки закрывают пробками и встряхивают, затем элюата сливают в кварцевые кюветы и измеряют оптическую плотность опытной пробы против холостой.

Обработка результатов.

Содержание бензойной и сорбиновой кислот в продукте (мг / кг или мг / л) рассчитывают по формуле:

H0'V1'm

С = 1000ьК'F' —————-

Hct'V2'M

Где 1000 — коэффициент, учитывающий разведения стандартов;

К — коэффициент, учитывающий потери при изъятии, равно при перегонке с паром в экстракции для бензойной кислоты — 1,2, а для сорбиновой кислоты 1,25.

F — коэффициент разведения элюата перед измерением оптической плотности.

H0 — оптическая плотность опытной пробы относительно холостой.

НСТ — оптическая плотность стандарта относительно холостой.

V1-объем экстракта, см3.

V2 — объем экстракта, нанесенного на пластинку, мкл.

M — масса продукта, взятого на анализ, г.

M — количество стандарта, нанесенного на пластинку, мкг.

Контрольные вопросы

1. Какие вещества называют пищевыми добавками?

2. Что такое консерванты?

3. Какие консерванты используются в пищевой промышленности?

4. Почему консерванты на основе сорбиновой кислоты часто используют вместе с бензойной кислотой?

5. Каковы допустимые дозы для человека сорбиновой и бензойной кислот?

6. Каким методом определяют содержание сорбиновой и бензойной кислот в пищевых продуктах?

7. Как проводят пробоподготовку перед хроматографирования сорбиновой и бензойной кислот?

8. Какую смесь растворителей и в каком соотношении используют для хроматографирования бензойной и сорбиновой кислот?

9. Как подтверждают наличие бензойной и сорбиновой кислот на пластинке?

10.Как проводят количественное определение бензойной и сорбиновой кислот?

Лабораторная работа № 2

Тема: Определение содержания крахмала в колбасных изделиях

Цель работы:Овладение методы качественного и количественного определения содержания крахмала в колбасных изделиях.

Задание на выполнение работы

Определить содержание крахмала в образцах колбасных изделий качественным и количественным методами.